Принципы криоконсервации

          Криоконсервация – охлаждение с использованием криопротекторов и хранение при низких температурах (-196^o С, в жидком азоте) в специальных хранилищах. Существуют различные протоколы и способы заморозки и хранения для разных объектов.
В 1940-х годах было показано, что добавление глицерола при заморозке клеток защищает их от разрушения и повышает выживаемость после разморозки. Таким образом начался поиск веществ, которые обладают свойствами криопротекторов (диметилсульфоксид, 1,2-пропандиол). Опыт криоконсервации различных типов клеток показал, что чем больше размер клетки (замораживаемого объекта), тем больше сложностей при заморозке.
Сегодня существуют разработанные правила и протоколы криоконсервации с использованием программируемых замораживателей, а также коммерческие среды для заморозки и разморозки, состав которых подобран для определенного объекта.
Не смотря на то, что все образцы хранятся в закрытом виде в отдельных контейнерах, перед заморозкой своих клеток необходимо пройти обследование для определения вирусных инфекций.

Криоконсервация эякулята (сперматозоидов)

          Началом истории криоконсервации мужских гамет можно считать 1866 год, когда итальянский военный врач Мантегазза опубликовал материал о способности сперматозоидов быков и лошадей к оплодотворению после экспозиции спермы этих животных при – 15^о С. Им также было предложено создание банка замороженной спермы для солдат, которые участвовали в боевых действиях. 
В 1954 году Бунг и Шерман впервые опубликовали материал о рождении ребенка после искусственной инсеминации криоконсервированной с помощью глицерола спермой, что положило начало использованию замороженных сперматозоидов при лечении бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий. 
           Заморозка сперматозоидов широко используется при лечении бесплодия в различных случаях. Необходимо помнить, что активность сперматозоидов после разморозки снижается, поэтому для выбора метода лечения пары важным этапом является контрольная разморозка небольшого количества материала, по результатам которой определяется выбор метода и пригодность образца для хранения.
Криоконсервированный эякулят хранится в криобанке до 10 лет, обязательными условиями хранения являются пригодность размороженного образца для методик ВРТ и оформленное заявление-договор об условиях хранения и разморозки, так как замороженный образец является собственностью пациента. 
К криоконсервации сперматозоидов прибегают не только супружеские пары, обратившиеся в клиники ВРТ, но и одинокие мужчины, которые на данный момент не могут создать семью, занятые на вредном производстве или перед проведением лечения, которое может повлиять на их репродуктивную функцию.

Криоконсервация ооцитов (женских половых клеток)
          Заморозка ооцитов предлагается женщинам фертильного возраста, у которых репродуктивная функция может быть под угрозой нарушения вследствие медикаментозного лечения, например при лечении онкозаболеваний, что дает возможность сохранить репродуктивный потенциал. Альтернативой криоконсервации отдельных клеток является сохранение овариальной ткани, эта технология имеет лучший потенциал для сохранения большого количества ооцитов, но она только начала внедрятся в клиническую практику.
Для того, чтобы провести цикл заморозки-разморозки ооцитов, необходимо получить достаточное количество ооцитов, поэтому перед извлечением ооцитов из яичников проводится предварительная стимуляция (как в циклах ЭКО). Получение ооцитов происходит под ультразвуковым контролем и общим наркозом.
Обычно ооциты сохраняют до 10 лет, но в случаях, когда пациентка нуждается в более длительном сохранении ее клеток, срок хранения продлевается.
Процедура заморозки-разморозки неблагоприятно воздействует на оболочку ооцита, что затрудняет проникновение сперматозоидов при процедуре классического ЭКО, поэтому оплодотворение ооцитов после разморозки проводят с помощью процедуры ICSI (инъекция одного сперматозоида в ооцит). 
Процент беременности после переноса нормально развивающихся эмбрионов меняется в зависимости от индивидуальных особенностей пациентки и зависит от многочисленых факторов, в том числе возраста пациентки до заморозки и после разморозки. Поэтому трудно сделать прогноз наступления беремености.
Важно понимать, что не все ооциты выживают после разморозки и не все выжившие нормально оплодотворяются. 

Криоконсервация эмбрионов в программах ЭКО
           Первая успешная заморозка эмбрионов была проведена в 1972 году. Группе ученных в составе Мазур, Лейбо и Витингама удалось получить здоровое потомство у мыши при переносе в полость матки размороженных эмбрионов после криоконсервации. И только в 1980 году развитие методов криоконсервации привело к первой беременности у женщины после ЭКО с использованием размороженных эмбрионов. На 2003 год в ведущей клинике мира по ВРТ Born Hall было проведено 78% циклов ЭКО с использованием размороженных эмбрионов. 
           Криоконсервация эмбрионов предлагается парам, у которых в циклах ЭКО после переноса в полость матки остались эмбрионы хорошего качества, пригодные для заморозки. Криоконсервация эмбрионов повышает вероятность наступления беременности в расчете на один цикл стимуляции, поэтому дает возможность получить желаемую беременность без повторных стимуляций и снизить материальные затраты.
           Срок хранения эмбрионов – до 5 лет. Для того, чтобы принять решение о количестве размораживаемых эмбрионов, нужно знать, что 35 -40 % эмбрионов не выживают или не развиваются после проведения цикла криоконсервации.